![[personal profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/user.png){kind=small}
imbg Человеческие эмбриональные клетки почек HEK293 - одни из самых популярных объектов исследований в биологии. Неприхотливые и выносливые почти как Hela (помните нашу статью о судьбе этой клеточной линии), они обладают одним преимуществом - они очень легко трансфецируются любыми плазмидами с помощью самых дешевых реактивов. Та же Hela или ряд других клеток чаще всего требуют довольно дорогих реактивов для доставки плазмид внутрь. А некоторые - например фибробласты - вообще не трансфецируются никак, помимо вирусов.
Клетки HEK 293 с YFP маркером
Есть две линии 293-тьих: одну мы используем для рутинных опытов, а другие - 293Т - для производства вирусов или наработки белков. Мне всегда было недосуг почитать, чем эти два вида отличаются. Пока я случайно не побывална лекции по клеточной биологии у местных студентов-медиков (они такое изучают на втором курсе). Итак, конспектирую по памяти для себя, чтоб не забыть, и буду благодарен за указание неточностей и ошибок: я хотел бы сохранить эту информацию для себя, а более надежного вместилища, чем ЖЖ, не вижу.
Итак,из человеческого эмбриона были взяты клетки почки. Как известно, для того чтоб их можно было культивировать бесконечно, клетки нуждаются в иммортализации. Это было произведено с помощью инфицирования их аденовирусов пятого серотипа. После отбора большого количества клонов был найден тот, кто стал прародителем клеточной линии. Его порядковый номер был 293. У НЕК293 постоянно синтезируются вирусные белки E1A и Е1В (Pubmed), что дает клеткам бессмертие, а также несколько видоизменяет метаболизм клетки: это надо всегда иметь в виду, перед тем как планировать изучить новый процес с использованием этой линии.
Позднее HEK293 были трансфецированы еще и Т-антигеном SV-40 вируса. Этот белок сам по себе может иммортализировать клетки, но в случае с уже бессмертными НЕК 293 он добавил возможность эписомальной репликации любых плазмид, содержащих SV40 Ori репликон - а его содержат многие ходовые плазмиды. В результате плазмиды мсами мультиплицируются в клетках при трансфекции, и выход рекомбинантных белков растет на полпорядка и больше. Поэтому этот вид клеток часто используют для наработки рекомбинантных ретровирусов.
Вот такую лекцию, только еще и с картинками, прочитали студентам мединститута второго курса. И где мои шестнадцать лет?
Клетки HEK 293 с YFP маркером
Есть две линии 293-тьих: одну мы используем для рутинных опытов, а другие - 293Т - для производства вирусов или наработки белков. Мне всегда было недосуг почитать, чем эти два вида отличаются. Пока я случайно не побывална лекции по клеточной биологии у местных студентов-медиков (они такое изучают на втором курсе). Итак, конспектирую по памяти для себя, чтоб не забыть, и буду благодарен за указание неточностей и ошибок: я хотел бы сохранить эту информацию для себя, а более надежного вместилища, чем ЖЖ, не вижу.
Итак,из человеческого эмбриона были взяты клетки почки. Как известно, для того чтоб их можно было культивировать бесконечно, клетки нуждаются в иммортализации. Это было произведено с помощью инфицирования их аденовирусов пятого серотипа. После отбора большого количества клонов был найден тот, кто стал прародителем клеточной линии. Его порядковый номер был 293. У НЕК293 постоянно синтезируются вирусные белки E1A и Е1В (Pubmed), что дает клеткам бессмертие, а также несколько видоизменяет метаболизм клетки: это надо всегда иметь в виду, перед тем как планировать изучить новый процес с использованием этой линии.
Позднее HEK293 были трансфецированы еще и Т-антигеном SV-40 вируса. Этот белок сам по себе может иммортализировать клетки, но в случае с уже бессмертными НЕК 293 он добавил возможность эписомальной репликации любых плазмид, содержащих SV40 Ori репликон - а его содержат многие ходовые плазмиды. В результате плазмиды мсами мультиплицируются в клетках при трансфекции, и выход рекомбинантных белков растет на полпорядка и больше. Поэтому этот вид клеток часто используют для наработки рекомбинантных ретровирусов.
Вот такую лекцию, только еще и с картинками, прочитали студентам мединститута второго курса. И где мои шестнадцать лет?
