первый вопрос учтен. Второй вопрос - слишком личный ) - задайте ей лично через комментарии (когда интервью будет опубликовано, я дам ссылку в этом ЖЖ) На третий же ответ дать могу я, поскольку работаю над тем же: основные инстьтрументы это сиРНК (худший вариант, потому что включает интерфероновую защиту, и это дает "фон"); нокаутные клеточные линии (или раковые клетки с интегрированными в геном shRNA, или фибробласты из нокаутных эмбрионов мышей: последние более адекватны, но трансфецировать их очень трудно - только вирусами - это большой минус); нокаутные мыши - это уже высший пилотаж, к тому же очень долго и дорого. Их получают в конце, когда известно что смотреть. В виде анектода - в этой статье (http://dx.doi.org/10.1038/nature09283) работа сделана на нокаутных мышах, полученных еще в 2001 году. Но долгое время не могли найти, что ж в них не так (потребовалось почти 10 лет). Убиквитинирование изучают in vitro или при овер-экспрессии в клетках мутантных убиквитином (заменен Lys48Ala; Lys63Ala, все лизины заменены на аланины и т.п.). Последний подход позволяет определить вид убиквитинирования, участвующий в данном изучаемом процессе.
![[personal profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/user.png){kind=small}
no subject
Date: 2010-10-15 06:02 pm (UTC)Второй вопрос - слишком личный ) - задайте ей лично через комментарии (когда интервью будет опубликовано, я дам ссылку в этом ЖЖ)
На третий же ответ дать могу я, поскольку работаю над тем же: основные инстьтрументы это сиРНК (худший вариант, потому что включает интерфероновую защиту, и это дает "фон"); нокаутные клеточные линии (или раковые клетки с интегрированными в геном shRNA, или фибробласты из нокаутных эмбрионов мышей: последние более адекватны, но трансфецировать их очень трудно - только вирусами - это большой минус); нокаутные мыши - это уже высший пилотаж, к тому же очень долго и дорого. Их получают в конце, когда известно что смотреть. В виде анектода - в этой статье (http://dx.doi.org/10.1038/nature09283) работа сделана на нокаутных мышах, полученных еще в 2001 году. Но долгое время не могли найти, что ж в них не так (потребовалось почти 10 лет).
Убиквитинирование изучают in vitro или при овер-экспрессии в клетках мутантных убиквитином (заменен Lys48Ala; Lys63Ala, все лизины заменены на аланины и т.п.). Последний подход позволяет определить вид убиквитинирования, участвующий в данном изучаемом процессе.